丝袜英语 KAPA 文库定量试剂盒 (I

丝袜英语

KAPA文库定量试剂盒丝袜英语

传统DNA文库定量的尺度进程蹧跶东谈主力、时辰，老本高，而单独接收惯例章量的瓜代测量的是总的核算浓度，且机灵度低、的确度差。最好的簇密度或模板与磁珠的比率取决于符合的能进行PCR扩增的DNA分子的浓度，KAPA文库定量试剂盒留心通过高性能qPCR的瓜代对文库进行定量，减少簇密度或模板与磁珠比例的相反，同期减少传统尺度进程的时辰消耗、排斥腾贵的滴定操作。

1、居品愚弄

　能准细目量大于0.0002pM包含无缺引物序列的文库

　能准细目量GC含量跨度大的文库

在线播放

　能准细目量平均片断长度为1kb的文库

2、KAPA文库定量试剂盒进程

　　试剂盒包含：KAPA SYBR FAST qPCR、6个线性DNA尺度品（10倍浓度稀释）、10×Primer Premix

1.将1ml的Primer Premix加入到5ml的KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix(2x)中；

2.稀释dsDNA文库

用10mM Tris-HCI对文库进行1:1000倍稀释，若是需要可进行：1:2000，1:4000，1:8000稀释；

3.准备qPCR反馈

20μl反馈体系：12μl的KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix（含Primer Premix）、4μl PCR水、4μl稀释的文库DNA或DNA尺度品；丝袜英语

4.qPCR反馈

肇端变性5分钟，然后35个轮回（95℃30秒、退火/延长60℃45秒）；

5.数据分析

证明扩增效果位于90-110%之间；

6.臆测文库浓度

凭据讲明书提供的公式推算齐备文库浓度；

7.凭据臆测所得的文库浓度推算未稀释的文库浓度，然后进行下一步实践。

3、居品上风

（1）qPCR文库定量简化职责进程

KAPA文库定量试剂盒排斥了蹧跶时辰且腾贵的滴定操作，提供了简化高通量进程的考究阵势。

（2）可靠的文库定量粗略使簇密度均一性好

（3）qPCR能灵验扩加多样类型模板

传统qPCR试剂适用于短片断扩增，而对长片断、GC含量不平衡、复杂结构的片断扩增效果低，某些文库分子的定量弗成靠。为了定量复杂DNA文库，KAPA非常修订了一种基于SYBR Green qPCR的酶，能灵验扩增对野生型酶来说扩增贫乏的模板。KAPA文库定量试剂盒包含了该基因工程修订酶以确保能灵验扩增长片断及GC含量跨度大的文库，对文库定量准确。

上图：qPCR扩增前后片断大小散播　扩增前（灰色区）和用3种生意化的qPCR mixes （KAPA SYBR Fast(蓝)，竞争试剂S（红），亚洲色网竞争试剂F（橙））扩增后的片断大小散播。对比试剂包含野生型Taq酶。反馈按如下轮回材干：95℃ 10min，40个轮回95℃ 10sec 60℃ 45sec。

上图：巩固的扩增使不同文库qPCR定量准确KAPA文库定量试剂盒用于定量两个Illumina GA文库的浓度，这两个文库GC含量极度（Rhodococcus sp.～70%GC，如图，Staphylococcus sp.～35%GC未展示）。两个文库扩增效果均大于95%。样本畅通两倍稀释（1:1000到1:16000），每个梯度3个近似，PCR反馈参照居品使用讲明书推选参数。

可靠的DNA定量尺度品，批次之间相反最小

上图：KAPA文库文库定量试剂盒的批次间相反（Roche Titanium系列平台）通过分析3个不同批次（红、粉、蓝）居品的尺度品的扩增图谱进行相比。每个点开辟3个近似，并臆测平均值。

上图：批次间及试剂盒间的相反最小　使用不同批次和统一批次不同KAPA文库定量试剂盒（Illumina GA平台）对9个东谈主源DNA文库和两个micro　DNA文库进行定量并相比定量死心。

4、二代测引言库定量居品信息

货号居品规格讲明书 KK4800 DNA Quant Kit Roche 454 FLX 6×80μl，1ml 下载下载 KK4801 Primer Premix Roche 454 FLX 1ml KK4802 DNA Quant Kit Roche 454 Titanium 6×80μl，1ml KK4803 Primer Premix Roche 454 Titanium 1ml KK4806 DNA Quant Kit ABI SOLiD 6×80μl，1ml KK4807 Primer Premix ABI SOLiD 1ml KK4808 DNA Quant Kit Illumina GA Revised Primers 6×80μl，1ml KK4809 Primer Premix Illumina GA Revised Primers 1ml KK4812 DNA Quant Kit-Ion Torrent 6×80μl，1ml KK4813 DNA Quantification Primer Premix -Ion Torrent 1ml KK4900 Library Quantification DNA Standards(454 FLX/Lib-A) 6×80μl KK4902 Library Quantification DNA Standards(SOLiD) 6×80μl KK4903 Library Quantification DNA Standards(Illumina) 6×80μl KK4904 Library Quantification DNA Standards(Ion Torrent) 6×80μl KK4820 Library Quant Kit，Roche 454 FLX-SYBR Fast Universal 500反馈 KK4821 Library Quant Kit，Roche 454 Titanium-SYBR Fast Universal 500反馈

KK4824

Library Quant Kit，Illumina GA revised primers-SYBR Fast Universal 500反馈 KK4823 Library Quant Kit，ABI SOLiD-SYBR Fast Universal 500反馈 KK4830 Library Quant Kit，Roche 454 FLX-SYBR Fast ABI Prism 500反馈 KK4831 Library Quant Kit，Roche 454 Titanium-SYBR Fast ABI Prism 500反馈 KK4835 Library Quant Kit，Illumina GA revised primers-SYBR Fast ABI Prism 500反馈 KK4833 Library Quant Kit，ABI SOLiD-SYBR Fast ABI Prism 500反馈 KK4840 Library Quant Kit，Roche 454 FLX-SYBR Fast Bio-Rad iCycler 500反馈 KK4841 Library Quant Kit，Roche 454 Titanium-SYBR Fast Bio-Rad iCycler 500反馈 KK4844 Library Quant Kit，Illumina GA revised primers-SYBR Fast Bio-Rad iCycler 500反馈 KK4843 Library Quant Kit，ABI SOLiD-SYBR Fast Bio-Rad iCycler 500反馈 KK4850 Library Quant Kit，Roche 454 FLX-SYBR Fast Roche Light Cycler480 500反馈 KK4851 Library Quant Kit，Roche 454 Titanium-SYBR Fast Roche Light Cycler480 500反馈 KK4854 Library Quant Kit，Illumina GA revised primers-SYBR Fast Roche Light Cycler480 500反馈 KK4853 Library Quant Kit，ABI SOLiD-SYBR Fast Roche Light Cycler480 500反馈 KK4834 Library Quant Kit，Illumina GA ABI Prism Custom Kit-Sanger 500反馈 KK4827 Library Quant Kit，Ion Torrent PGM universal 500反馈下载 KK4838 Library Quant Kit，Ion Torrent PGM ABI Prism 500反馈 KK4847 Library Quant Kit，Ion Torrent PGM Bio-Rad iCycler 500反馈 KK4857 Library Quant Kit，Ion Torrent PGM Roche Light Cycler480 500反馈

丝袜 英语 KAPA 文库定量试剂盒 (I

丝袜英语 KAPA 文库定量试剂盒 (I